Thermo Fisher, C20046, Kit de etiquetado de proteínas EZ-Link™ DBCO

Kit de Marcaje de Proteínas EZ-Link™ DBCO. El kit de marcaje de proteínas EZ-Link DBCO proporciona todo lo necesario para marcar proteínas covalentemente con un grupo dibencilciclooctino (DBCO) para aplicaciones de química clic sin cobre. Este kit contiene los materiales necesarios para realizar cinco reacciones de marcaje y la posterior purificación para eliminar el exceso de reactivo DBCO. El TFP-PEG4-DBCO incluido en este kit reacciona fácilmente con las aminas primarias presentes en las proteínas para formar un grupo DBCO unido covalentemente que puede reaccionar posteriormente con un compañero de acoplamiento marcado con azida (suministrado por separado) para crear diversos bioconjugados.
Las características del kit de etiquetado de proteínas EZ-Link DBCO incluyen:
• Versátil: etiqueta proteínas (20–150 kDa) con volúmenes de 0.
5–5 ml
• Quimioselectivo: el DBCO reacciona selectivamente con las azidas.
• Heterobifuncional: reactivo frente a aminas y azidas.
• Estable: los ésteres de TFP son más estables hidrolíticamente que los ésteres de NHS, lo que permite utilizar menos reactivo.
• Conveniente: el etiquetado y la purificación se pueden completar en tan solo 90 minutos con 30 minutos de tiempo de práctica. El TFP-PEG4-DBCO proporcionado en este kit es un reticulante heterobifuncional que contiene un grupo tetrafluorofenilo (TFP) reactivo con amina y un grupo dibencilciclooctino (DBCO) reactivo con azida con un espaciador PEG4 solubilizante en agua entre ellos. En el primer paso de conjugación, el grupo TFP reacciona con una amina primaria en una proteína para formar un enlace amida estable y una fracción DBCO unida covalentemente. La purificación posterior elimina el exceso de reticulante de la solución que puede interferir con el segundo paso de etiquetado. Una vez que una proteína está etiquetada con DBCO y purificada, puede someterse a una cicloadición de azida-alquino promovida por cepa sin cobre (SPAAC) para formar un enlace triazólico estable con un compañero de acoplamiento marcado con azida (suministrado por separado) para la creación de diversos bioconjugados.
Las dibencilciclooctinas (DBCO) y las azidas son moléculas de acoplamiento bioortogonal, ya que pueden reaccionar en un sistema biológico sin interferir con los procesos bioquímicos normales. Como resultado, se minimiza el marcaje indeseable de las macromoléculas presentes en células o lisados. La reacción entre un DBCO y una azida puede utilizarse para diversas aplicaciones, como la creación de conjugados proteína-proteína, proteína-biomolécula o proteína-molécula pequeña.
Las reacciones clic clásicas implican una cicloadición azida-alquino catalizada por cobre para marcar o conjugar moléculas. Una desventaja de este método es que los iones de cobre pueden afectar la función proteica, dañar las células y reducir la fluorescencia de los fluoróforos. El DBCO se distingue por no requerir cobre para catalizar la reacción con una azida para la formación de triazol. La tensión en el anillo de ocho miembros permite que la reacción con moléculas modificadas con azida ocurra en ausencia de catalizadores, lo que previene el daño celular o proteico inducido por el cobre.
Reactividad química: Reactividad química
Método de etiquetado: etiquetado químico
Cantidad: 1 Kit
Fracción reactiva: éster de TFP, DBCO
Condición de envío: Hielo húmedo
Línea de productos: EZ-Link™
Tamaño de la unidad: cada una