Thermo Fisher, F2181, 5(6)-SFX (ácido 6-(fluoresceína-5-(y-6)-carboxamido) hexanoico, éster succinimidílico), isómeros mixtos

5(6)-SFX (ácido 6-(fluoresceína-5-(y-6)-carboxamido) hexanoico, éster succinimidílico), isómeros mixtos La fluoresceína es un reactivo de derivatización verde fluorescente común, mientras que los ésteres succinimidílicos se utilizan con frecuencia para el marcaje de las aminas primarias (R-NH2) de proteínas, oligonucleótidos modificados con amina y otras moléculas que contienen amina. Este éster succinimidílico 'SFX' contiene un espaciador amino-hexanoílo de siete átomos entre el fluoróforo y el grupo reactivo. Este espaciador separa el fluoróforo de la biomolécula a la que está conjugado, lo que reduce potencialmente la extinción que normalmente ocurre tras la conjugación. Los conjugados de fluoresceína resultantes se pueden detectar con conjuntos de filtros FITC o GFP estándar. Los colorantes basados ​​en fluoresceína y sus conjugados tienen una tasa relativamente alta de fotoblanqueo y una fluorescencia sensible al pH. Alexa Fluor™ 488 y Oregon Green™ 488 son colorantes alternativos cuyos espectros imitan los de la fluoresceína y son mucho más fotoestables con poca o ninguna sensibilidad al pH en el rango de pH fisiológico.
Presupuesto:
• Etiqueta fluorófora: fluoresceína
• Grupo reactivo: éster succinimidílico
• Reactividad: aminas primarias en proteínas y ligandos, oligonucleótidos modificados con amina
• Peso molecular: 586
• Coeficiente de extinción: 74.000 cm-1M-1
• Ex/Em del conjugado: 494/520 nm
• Colorantes espectralmente similares: Alexa Fluor™ 488, GFP. Reacción de conjugación típica. Los reactivos amino-reactivos pueden conjugarse con prácticamente cualquier proteína o péptido; el protocolo proporcionado está optimizado para anticuerpos IgG. Puede ajustar la reacción para cualquier cantidad de proteína, pero la concentración de proteína debe ser de al menos 2 mg/ml para obtener resultados óptimos. Recomendamos probar tres grados diferentes de marcaje, utilizando tres proporciones molares diferentes de reactivo/proteína.
El éster succinimidílico de fluoresceína normalmente se disuelve en dimetilformamida (DMF) o dimetilsulfóxido (DMSO) anhidro de alta calidad y la reacción se lleva a cabo a 0.
1–0.
Tampón de bicarbonato de sodio 2 M, pH 8.
3, a temperatura ambiente durante 1 hora. Dado que el pKa de la amina terminal es menor que el del grupo épsilon-amino de la lisina, se puede lograr un marcaje más selectivo del extremo amino utilizando un tampón con un pH más cercano a la neutralidad.
Purificación del conjugado: Los anticuerpos marcados se separan típicamente del colorante libre mediante una columna de filtración en gel, como Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 o equivalente. Para proteínas de mayor o menor tamaño, seleccione un medio de filtración en gel con un límite de peso molecular adecuado o purifique mediante diálisis.
Los ésteres succinimidílicos de fluoresceína reactivos a aminas de isómeros mixtos también están disponibles en un tamaño de unidad de 10 x 1 mg (F6129), un solo isómero (F6106) y con un espaciador que es más hidrófilo que el espaciador SFX (F6130), así como en numerosos kits para etiquetar proteínas y ácidos nucleicos (Ésteres activos y kits para etiquetar proteínas y ácidos nucleicos - Tabla 1.
2).
Reactividad química: Amina
Emisión: 520
Excitación: 494
Etiqueta o colorante: FITC (fluoresceína)
Cantidad: 10 mg
Fracción reactiva: éster activo, éster succinimidílico
Condición de envío: Temperatura ambiente
Tipo de etiqueta: Tintes clásicos
Tamaño de la unidad: cada una