Thermo Fisher, K10201, Champion™ pET102 Directional TOPO™ Expression Kit con BL21 Star™ (DE3) One Shot™ E. coli químicamente competente

Kit de expresión Champion™ pET102 Directional TOPO™ con BL21 Star™ (DE3) One Shot™, E. coli químicamente competente. El sistema de expresión Champion™ pET produce la mayor producción de proteínas en E. coli. Durante la expresión, la proteína de interés puede alcanzar niveles superiores al 50 % de la proteína celular total. Basado en vectores de expresión T7 desarrollados originalmente por Studier y colegas (1-3), se logra una alta expresión porque la ARN polimerasa T7 es más procesiva que la ARN polimerasa nativa de E. coli y se dedica a la transcripción del gen de interés. La producción de proteínas se ve potenciada aún más en el sistema por la cepa de expresión BL21 Star™ de E. coli, que mejora significativamente la estabilidad de las transcripciones de ARNm y multiplica por diez la expresión de proteínas.
La clonación direccional TOPO™ simplificada y eficiente permite introducir rápidamente un vector de expresión Champion™ pET. Estos kits incluyen vectores de expresión Champion™ pET linealizados y activados por topoisomerasa I para una clonación direccional de cinco minutos. La tecnología de clonación direccional TOPO™ facilita la expresión génica porque:
• Se utiliza una enzima correctora para la PCR, lo que da como resultado menos errores en los genes clonados.
Más del 90 % de los clones tienen la orientación correcta para la expresión génica, lo que reduce el tiempo dedicado al cribado de colonias. Se encuentran disponibles siete vectores de expresión Champion™ pET Directional TOPO™ (Figura 1 y Tabla 1): Cada vector contiene un promotor T7lac para una expresión de alto nivel. Se dispone de opciones flexibles para simplificar la detección de proteínas, escindir etiquetas de purificación, seleccionar clones portadores de plásmidos y/o mejorar la producción de proteínas.
Con los vectores Champion™ pET Directional TOPO™, se puede esperar una producción de proteínas de alto nivel. La Figura 2 muestra la expresión del gen lacZ en los vectores Champion™ pET Directional TOPO™. La Figura 3 demuestra la escisión eficiente mediante la proteasa TEV de la etiqueta N-terminal de una proteína de fusión β-galactosidasa expresada a partir de pET151/D-TOPO™.
Resistencia bacteriana a los antibióticos: ampicilina (AmpR)
Cepa bacteriana o de levadura: BL21 Star™(DE3)
Escisión: Sitio de reconocimiento de EK (enteroquinasa)
Sistema Constitutivo o Inducible: Inducible
Mecanismo de expresión: expresión celular
Sistema de expresión: E. coli
Agente inductor: IPTG
Tipo de producto: Kit de expresión TOPO
Cantidad: 20 reacciones
Agente de selección (eucariota): Ninguno
Vector: pET
Método de clonación: TOPO direccional
Línea de productos: One Shot™
Promotor: T7, lacO
Etiqueta de proteína: Etiqueta His (6x), Etiqueta de epítopo V5, Tiorredoxina
Tamaño de la unidad: cada una