Thermo Fisher, K106001, GeneSwitch™ Mammalian Expression Kit, kit completo

Kit de Expresión en Mamíferos GeneSwitch™, kit completo. Activación de la expresión desde los niveles basales más bajos. El sistema GeneSwitch™ para la expresión inducible en mamíferos es ideal para experimentos que requieren los niveles más bajos de expresión no inducida. El vector de expresión pGene/V5-His proporciona un promotor mínimo, GAL4-E1b, que consiste en los sitios de unión para la proteína de unión al ADN Gal4 de levadura, seguidos de la secuencia TATA del promotor E1b del adenovirus. Sin factores adicionales, el promotor GAL4-E1b permanece transcripcionalmente silenciado.
Para activar la transcripción desde el promotor GAL4-E1b, la proteína reguladora GeneSwitch™ se expresa a partir de un promotor TK mínimo en el vector pSwitch. La proteína GeneSwitch™ tiene tres dominios funcionales:
• Dominio de unión al ADN de Gal4 (Gal4-DBD) para unir la proteína reguladora al promotor GAL4-E1b
• Dominio de unión del ligando del receptor de progesterona humano truncado (hPR-LBD) que sufre un cambio conformacional cuando se une al antagonista de la progesterona, mifepristona.
• Dominio de activación de la transcripción del factor de transcripción NFØB p65 (p65AD) para activar la transcripción desde el promotor silentGAL4-E1b. En ausencia de mifepristona, la conformación de la región hPR-LBD impide que la proteína reguladora GeneSwitch™ active la transcripción desde el promotor GAL4-E1b. Cuando se añade mifepristona y se une a la región hPR-LBD, la proteína reguladora GeneSwitch™ adopta una conformación que le permite estimular la transcripción desde el promotor GAL4-E1b (Figuras 1 y 2).
La inducción del sistema GeneSwitch™ activa el gen de interés en el vector pGene/V5-His. Además, cuatro sitios de unión de Gal4 situados aguas arriba del promotor mínimo HSV TK en pSwitch pueden unirse a la proteína reguladora pSwitch. Por lo tanto, la adición de mifepristona aumenta la producción de la proteína reguladora (Figura 1). El aumento de los niveles de la proteína reguladora GeneSwitch™ induce el gen de interés desde pGene/V5-His a niveles que pueden aproximarse a los de los promotores virales.
El kit GeneSwitch™ ofrece niveles de expresión excepcionalmente bajos, tanto no inducidos como inducidos, en células de mamíferos. El sistema proporciona el vector de expresión pGene/V5-His con el promotor sintético mínimo GAL4-E1b, que permanece inactivo transcripcionalmente hasta su activación. La proteína reguladora GeneSwitch™ se une al promotor GAL4-E1b para activar la transcripción tras la adición de mifepristona. Además, la proteína GeneSwitch™ sobrerregula su propia expresión, lo que resulta en una expresión amplificada del gen de interés de pGene/V5-His. pGene/V5-His ofrece varias características que facilitan el análisis de la expresión y la purificación de proteínas recombinantes en células de mamíferos:
• Etiqueta de epítopo V5 C-terminal para detección con anticuerpos anti-V5
• Etiqueta de polihistidina C-terminal (6xHis) para purificación rápida con resina quelante de níquel y detección con anticuerpos anti-His (C-term)
• El gen de resistencia Zeocin™ para una selección eficaz tanto en células de mamíferos como en E. coli. Sistema constitutivo o inducible: inducible.
Tipo de administración: Transfección
Para usar con (aplicación): Expresión regulada
Agente inductor: mifepristona
Tipo de producto: Kit de expresión de mamíferos
Cantidad: 1 kit
Agente de selección (eucariota): Zeocin™
Vector: pGene
Método de clonación: enzima de restricción/MCS
Línea de productos: GeneSwitch™
Promotor: E1b (GAL4-E1b)
Etiqueta de proteína: Etiqueta His (6x), Etiqueta de epítopo V5
Tamaño de la unidad: cada una