Kit de clonación PCR CloneJET de Thermo Fisher, K1232

El kit de clonación PCR Thermo Scientific CloneJET de 40 reacciones, también disponible con células DH10B (K123120), es un sistema avanzado de selección positiva para la clonación de alta eficiencia de productos de PCR generados con cualquier ADN polimerasa termoestable. Se puede clonar cualquier otro fragmento de ADN romo o con extremos pegajosos. Es ideal para fragmentos de ADN fosforilados o no fosforilados. La ligación al vector de selección positiva incluido tarda solo 5 minutos, lo que produce más del 99 % de clones recombinantes. Los productos de PCR con extremos romos generados con una enzima correctora se ligan directamente al vector de clonación. Los productos de PCR generados con ADN polimerasas sin correctora o mezclas de ADN polimerasas se despuntan antes de la ligación en 5 minutos con la enzima de despuntado de ADN termoestable incluida en el kit. Todas las cepas comunes de E. coli de laboratorio se pueden transformar directamente con el producto de ligación. Características: El kit de clonación por PCR CloneJET contiene un novedoso vector de clonación de selección positiva, pJET1.2/blunt, listo para usar. Este vector contiene un gen de enzima de restricción letal que se altera mediante la ligadura de un inserto de ADN en el sitio de clonación. Como resultado, solo las células bacterianas con plásmidos recombinantes pueden formar colonias. Las moléculas del vector pJET1.2/blunt recircularizadas que carecen de inserto expresan una enzima de restricción letal que destruye la célula huésped de E. coli tras la transformación. Esta selección positiva acelera drásticamente el proceso de cribado de colonias y elimina los costes adicionales de la selección azul/blanca. Para facilitar el mapeo y la manipulación del inserto, el sitio de clonación múltiple del vector de clonación pJET1.2/blunt contiene dos secuencias de reconocimiento BglII que flanquean el sitio de inserción. Además, el vector contiene un promotor T7 para la transcripción in vitro e in vivo, así como para la secuenciación del inserto. Características destacadas.
•Rápido: clonación por PCR en solo 5 minutos
•Máxima eficiencia– > 99% de clones positivos
•Sin antecedentes de clonación: vector de selección positiva
•Versátil: ideal para clonación de extremos romos o pegajosos
•Económico: sin costosas aplicaciones de cribado azul/blanco
• Clonación de productos de PCR con extremos romos o con cola 3'-dA de hasta 10 kb
• Clonación de fragmentos de ADN generados por enzimas de restricción
• Secuenciación de ADN clonado
•transcripción in vitro e in vivo de insertos clonados del promotor T7Incluye
• pJET1. 2/vector de clonación roma
•Ligasa de ADN T4
• Tampón de reacción 2X
• Enzima que embota el ADN
• pJET1.2Cebador de secuenciación directa (5'-CGACTCACTATAGGGAGAGCGGC-3')
• pJET1.2Cebador de secuenciación inversa (5'-AAGAACATCGATTTTCCATGGCAG-3')
• Producto de PCR de control
•Agua, libre de nucleasas
Protocolo detallado: Antes de la electroporación, purifique siempre la mezcla de ligadura en columna utilizando, por ejemplo, el kit de purificación de PCR GeneJET n.° K0701 o cloroformo para extraerla. La electroporación se inhibe por la presencia de proteínas y sales en la mezcla. Resistencia bacteriana a antibióticos: ampicilina (AmpR).
Método de clonación: enzima de restricción/MCS, PCR roma
Para usar con (aplicación): Clonación por PCR
Número de reacciones: 40 reacciones
Línea de productos: CloneJET
Tipo de producto: Kit de clonación
Cantidad: 40 Reacciones
Tipo de muestra: Productos de PCR
Vector: pJET1.2/blunt
Formato: Kit
Tamaño de la unidad: cada una