Thermo Fisher, K1251, kit de clonación y expresión aLICator LIC 2 (etiqueta His/EK N-terminal)

Kit de clonación y expresión aLICator LIC 2 (His-tag N-terminal/EK). El sistema de clonación y expresión aLICator™ LIC de Thermo Scientific está diseñado para una clonación rápida y eficiente, independiente de la ligación, y una regulación estricta de la expresión génica en E. coli. Los vectores de expresión bacteriana pLATE están diseñados para altos niveles de expresión de la proteína diana junto con una expresión mínima de fondo (no inducida), lo que permite la expresión de proteínas tóxicas para las células de E. coli. Para optimizar y facilitar el proceso de clonación de insertos en el vector de expresión, el sistema aLICator utiliza tecnología de clonación direccional LIC, un procedimiento rápido que proporciona una alta eficiencia de clonación. La expresión estrictamente regulada y la clonación direccional rápida y eficiente convierten al sistema de clonación y expresión aLICator LIC en la mejor opción para la clonación y expresión génica rutinaria y tóxica en E. coli. Características destacadas.
• Clonación LIC de alta eficiencia
• Control estricto de la expresión genética
• Expresión de alto rendimiento
• Versátil: expresión de proteínas etiquetadas o no etiquetadas con opción de eliminación de etiquetas Aplicaciones
• Clonación direccional de productos de PCR
• Expresión de proteínas estrechamente regulada
Expresión de genes tóxicos. Principio: El sistema de clonación aLICator LIC utiliza tecnología de clonación direccional LIC para optimizar y facilitar la clonación en un vector de expresión. LIC garantiza una alta eficiencia de clonación superior al 95 % y elimina la necesidad de ligadura y digestión con enzimas de restricción. El método LIC utiliza la ADN polimerasa T4 para crear salientes monocatenarios específicos de 14 a 21 nucleótidos en los vectores pLATE y los insertos de ADN. La ADN polimerasa T4 tiene dos actividades enzimáticas: actividad polimerasa 5'→3' y actividad exonucleasa 3'→5'. La actividad exonucleasa elimina nucleótidos de los extremos 3' del ADN, mientras que la actividad polimerasa restaura la cadena utilizando dNTP y la cadena complementaria de ADN como plantilla. En el protocolo LIC, solo se incluye dGTP en la reacción, lo que equilibra las actividades de la exonucleasa 3'→5' y la polimerasa 5'→3' con la primera aparición de citosina en la cadena complementaria. Tras la hibridación, el vector LIC y el inserto se transforman en células competentes de E. coli sin el uso de la ADN ligasa T4. La formación de enlaces covalentes en las uniones vector-inserto ocurre dentro de la célula para producir un plásmido circular. Características: El sistema consta de cuatro kits basados ​​en la serie pLATE de vectores de expresión bacterianos:
•Kit de clonación y expresión aLICator™ LIC 1- vector pLATE11, expresión de proteína sin etiquetar.
•Kit de clonación y expresión aLICator™ LIC 2 (etiqueta His N-terminal/EK)—vector pLATE51, expresión de proteína etiqueta His N-terminal.
•Kit de clonación y expresión aLICator™ LIC 3 (etiqueta His C-terminal)—vector pLATE31, expresión de proteína con etiqueta His C-terminal.
•Kit de clonación y expresión aLICator™ LIC 4 (His-tag N-terminal/WQ)—vector pLATE 52, expresión de proteína His-tag N-terminal, escisión WELQut.
•Conjunto de clonación y expresión de LIC aLICator™ 1 (todo en uno/EK): vectores pLATE11, pLATE51 y pLATE31, elección de expresión de proteína con etiqueta His en el extremo N o C sin etiquetar.
• aLICator™ LIC Cloning and Expression Set 2 (Todo en Uno/WQ): vectores pLATE11, pLATE52 y pLATE31, con opción de expresión de proteína His tag sin etiquetar en el extremo N o C terminal, y escisión WELQut. Para proteínas con preferencia por la posición N o C terminal de la etiqueta 6xHis, se recomienda usar el kit N o C terminal adecuado. Cuando no se conocen bien la estructura y las características de la proteína, se recomienda clonar en los tres vectores y determinar el más compatible para futuras investigaciones. Resistencia bacteriana a antibióticos: Ampicilina (AmpR)
Método de clonación: Clonación LIC
Para usar con (aplicación): Clonación por PCR
Número de reacciones: 20 reacciones
Línea de productos: aLICator
Tipo de producto: Kit de clonación y expresión LIC
Promotor: T7
Etiqueta de proteína: Su etiqueta (6x)
Cantidad: 20 Reacciones
Tipo de muestra: Productos de PCR
Vector: placa
Formato: Kit
Tamaño de la unidad: cada una