Thermo Fisher, K175001, Kit de expresión de Pichia multicopia

Thermo Fisher, K175001, Kit de expresión de Pichia multicopia El kit de expresión de Pichia multicopia contiene el pPIC3.
Vectores 5K, pPIC9K y pAO815 para la producción y selección de cepas de Pichia que contienen más de una copia del gen de interés. En muchos casos, un mayor número de copias ha conllevado un aumento en los niveles de expresión.
pPIC9K y pPIC3.
5KEl pPIC9K y pPIC3.
Los vectores 5K portan el gen de resistencia a la kanamicina, que confiere resistencia al reactivo Geneticin™ en Pichia. La generación espontánea de múltiples eventos de inserción puede identificarse por la resistencia a niveles elevados de reactivo Geneticin™.
Los transformantes de Pichia se seleccionan en un medio deficiente en histidina y se analizan para determinar su nivel de resistencia al reactivo Geneticin™. La capacidad de crecer en altas concentraciones de Geneticin™ indica que múltiples copias del gen de resistencia a la kanamicina y del gen de interés están integradas en el genoma (1). El vector pPIC9K dirige la secreción de las proteínas expresadas, mientras que las proteínas expresadas por pPIC3.
5K permanecen intracelulares.
pAO815 es un vector de expresión de Pichia diseñado para clonar múltiples copias de un gen en un solo vector. El vector contiene un sitio BglII aguas arriba del gen 5'AOX1 y un sitio único BamH I aguas abajo de la señal de terminación de la transcripción (TT) 3'AOX1. Se requieren cuatro pasos para generar múltiples copias del gen de interés: 1. El gen se clona en el sitio único EcoR I del vector.
2. El constructo se digiere con BamH I y BglII para liberar el “casete de expresión” que contiene el promotor AOX1, el gen de interés y 3´AOX1TT.
3. Los concatémeros del casete de expresión se generan mediante ligadura in vitro.
4. Las copias múltiples se insertan nuevamente en el vector pAO815 y se transforman en Pichia.
Estos vectores también están disponibles por separado.
Resistencia bacteriana a los antibióticos: ampicilina (AmpR), gentamicina (GmR)
Cepa bacteriana o de levadura: KM71
Método de clonación: enzima de restricción/MCS
Mecanismo de expresión: expresión basada en células
Sistema de expresión: levadura
Para usar con (aplicación): Expresión de proteínas
Tipo de producto: Kit de expresión
Etiqueta de proteína: Sin etiquetar
Cantidad: 1 Kit
Agente de selección (eucariota): ampicilina (AmpR), gentamicina (GmR)
Tipo de célula: células de levadura
Formato: Kit
Promotor: AOX1
Especie: P. pastoris
Vector: pPIC
Tamaño de la unidad: cada una