Kit de clonación pENTR™/D-TOPO™ de Thermo Fisher, K240020SP

Thermo Fisher, K240020SP, Kit de Clonación pENTR™/D-TOPO™. Los kits de clonación pENTR™/D-TOPO™ utilizan una estrategia de clonación altamente eficiente de 5 minutos («Clonación TOPO™») para clonar direccionalmente un producto de PCR de extremo romo en un vector para su entrada en el Sistema Gateway™ o el Sistema MultiSite Gateway™. Los productos de PCR de extremo romo clonan direccionalmente con una eficiencia superior al 90 %, sin necesidad de ligasa, procedimientos post-PCR ni enzimas de restricción.
El kit viene con todo lo necesario para clonar y seleccionar el gen amplificado por PCR de su interés:
• Sistema Gateway™ listo: transporte rápidamente genes clonados entre múltiples sistemas de vectores
•Rápido y fácil: pase de PCR a clon de entrada Gateway™ en solo 3 pasos y tan solo ∼5 minutos de tiempo de manipulación
• Eficiente: consiga más del 90 % de clones con la inserción correcta en la dirección correcta
•Probado: rendimiento confiable durante más de una década. Descripción general de los kits de clonación pENTR™ /D-TOPO™. VECTOR. Vector pENTR™ /D-TOPO™. Vector de clonación direccional para ingresar al sistema Gateway. MÉTODO DE CLONACIÓN. Clonación direccional TOPO™. Ligadura direccional de aproximadamente 5 minutos basada en topoisomerasa de productos de PCR amplificados por polimerasa de corrección de extremos romos al vector. CÉLULAS COMPETENTES. Dos opciones. Elija entre kits con alta eficiencia o células competentes de crecimiento rápido. Acceso simple al sistema Gateway™. Para acceder al sistema Gateway™, simplemente amplifique por PCR su gen de interés y agregue el producto directamente al vector pENTR™/D-TOPO™ cargado con topoisomerasa provisto, incube 5 minutos y transforme las células competentes de E. coli provistas. Los clones de entrada Gateway™ resultantes que contienen attL están listos para una recombinación eficiente con los vectores de destino Gateway™ de su elección.
Vector pENTR™/D-TOPO™ optimizado. El vector pENTR™/D-TOPO™ (Figura 1) incluye sitios de secuenciación de los cebadores M13 y T7, y sitios de recombinación attL que flanquean el sitio de inserción del producto de PCR. Esto permite verificar fácilmente la secuencia de los clones y recombinarlos en los vectores de destino Gateway™ que contengan attR. Se utilizan un gen de resistencia a la kanamicina y un origen pUC para la selección y la propagación de alta densidad de copias en E. coli.
Clonación Direccional Simplificada. Con la tecnología de clonación Directional TOPO™, no se requieren limpiezas de PCR, preparación de vectores ni otros pasos de manipulación de ADN que requieren mucho tiempo. Simplemente añada su reacción de PCR directamente al vector cargado con topoisomerasa, incube durante 5 minutos, transforme y obtenga hasta un 90 % de clones insertados direccionalmente. Un saliente de cuatro bases en el vector se empareja con una secuencia de cuatro bases diseñada en el cebador directo utilizado en su reacción de PCR para proporcionar direccionalidad a la reacción de ligación de la topoisomerasa (Figura 2).
El poder de la tecnología de clonación por recombinación Gateway™. La tecnología de clonación por recombinación Gateway™ supera las limitaciones de la clonación mediada por restricción, permitiéndole acceder a prácticamente cualquier sistema de expresión en una simple reacción de recombinación Gateway™ de una hora, 99 % eficiente y reversible. La capacidad de transferir la misma secuencia de ADN entre diferentes vectores sin usar enzimas de restricción, ligasas, pasos de subclonación, cribado de innumerables colonias ni resecuenciación le ayudará a ahorrar tiempo, dinero y esfuerzo.
Tecnologías de clonación líderes. En materia de clonación, la tecnología de clonación TOPO™ y la tecnología de clonación por recombinación Gateway™ han sido un aliado confiable para miles de científicos durante más de diez años. Rápidas, fáciles de usar y eficientes, las tecnologías de clonación TOPO™ y recombinación Gateway™ permiten la clonación rápida y la posterior transferencia de genes entre una amplia gama de vectores de expresión Gateway™.
Cepa bacteriana o de levadura: TOP10
Tipo de célula: E. coli químicamente competente
Método de clonación: clonación TOPO
Para usar con (aplicación): Clonación
Tipo de producto: Kit de clonación
Promotor: T7
Cantidad: 20 Reacciones
Formato: Kit
Tamaño de la unidad: cada una