Thermo Fisher, K242020, kit de clonación pENTR™/SD/D-TOPO™, con One Shot™ TOP10 E. coli químicamente competente

Kit de clonación pENTR™/SD/D-TOPO™ con E. coli químicamente competente One Shot™ TOP10. Los kits de clonación pENTR™/SD/D-TOPO™ utilizan una estrategia de clonación altamente eficiente de 5 minutos («Clonación TOPO™») para clonar direccionalmente un producto de PCR de extremo romo en un vector para su entrada en el sistema Gateway™ o el sistema MultiSite Gateway™. Los productos de PCR de extremo romo se clonan direccionalmente en el vector de entrada pENTR™/SD/D-TOPO™ con una eficiencia superior al 90 % e incluyen una secuencia Shine-Dalgarno aguas arriba para su expresión en procariotas. El kit incluye todo lo necesario para clonar y seleccionar el gen de interés amplificado por PCR:
• Sistema Gateway™ listo: transporte rápidamente genes clonados entre múltiples sistemas de vectores
•Rápido y fácil: pase de PCR a clon de entrada Gateway™ en solo 3 pasos y tan solo ∼5 minutos de tiempo de manipulación
• Eficiente: consiga más del 90 % de clones con la inserción correcta en la dirección correcta
•Rendimiento confiable y comprobado durante más de una década. Descripción general de los kits de clonación pENTR™SD/D-TOPO™. VECTOR. Vector pENTR™/SD/D-TOPO™. Vector de clonación direccional para ingresar al sistema Gateway™ y optimizado para la expresión procariota. MÉTODO DE CLONACIÓN. Clonación direccional TOPO™. Ligadura direccional de aproximadamente 5 minutos basada en topoisomerasa de productos de PCR amplificados por polimerasa de corrección de extremos romos al vector. CÉLULAS COMPETENTES. Dos opciones. Elija entre kits con alta eficiencia o células competentes de crecimiento rápido. Acceso simple al sistema Gateway™. Para acceder al sistema Gateway™, simplemente amplifique por PCR su gen de interés y agregue el producto directamente al vector pENTR™/SD/D-TOPO™ cargado con topoisomerasa provisto, incube 5 minutos y transforme las células competentes de E. coli provistas. Los clones de entrada Gateway™ resultantes con attL están listos para una recombinación eficiente con los vectores de destino Gateway™ de su elección. Vector pENTR™ /SD/D-TOPO™ optimizado. El vector pENTR™ /SD/D-TOPO™ (Figura 1) incluye un potenciador traduccional del gen T7 10 y un sitio de unión al ribosoma (RBS) para la expresión óptima de la proteína nativa tras la recombinación con vectores de destino Gateway™ procariotas. También puede utilizar el vector para la expresión en otros sistemas hospedadores mediante la recombinación con diferentes vectores de destino. El vector cuenta con sitios de secuenciación de los cebadores M13 y T7 y sitios de recombinación attL que flanquean el sitio de inserción del producto de PCR. Esto permite verificar fácilmente la secuencia de los clones y recombinarlos en los vectores de destino Gateway™ que contengan attR de su elección. Un gen de resistencia a la kanamicina y un origen pUC se utilizan para la selección y la propagación de alto número de copias en E. coli. Clonación Direccional Simplificada. Con la tecnología de clonación Directional TOPO™, no se requieren limpiezas de PCR, preparación de vectores ni otros pasos de manipulación de ADN que requieren mucho tiempo. Simplemente añada su reacción de PCR directamente al vector cargado con topoisomerasa, incube durante 5 minutos, transforme y obtenga hasta un 90 % de clones insertados direccionalmente. Un saliente de cuatro bases en el vector se empareja con una secuencia de cuatro bases diseñada en el cebador directo utilizado en su reacción de PCR para proporcionar direccionalidad a la reacción de ligadura de la topoisomerasa (Figura 2). El poder de la tecnología de clonación por recombinación Gateway™. La tecnología de clonación por recombinación Gateway™ supera las limitaciones de la clonación mediada por restricción, permitiéndole acceder a prácticamente cualquier sistema de expresión en una simple reacción de recombinación Gateway™ de una hora, 99 % eficiente y reversible. La capacidad de transferir la misma secuencia de ADN entre diferentes vectores sin usar enzimas de restricción, ligasa, pasos de subclonación, cribado de innumerables colonias ni resecuenciación le ayudará a ahorrar tiempo, dinero y esfuerzo. Tecnologías de clonación líderes. En materia de clonación, la tecnología de clonación TOPO™ y la tecnología de clonación por recombinación Gateway™ han sido un aliado confiable para miles de científicos durante más de diez años. Rápidas, fáciles de usar y eficientes, las tecnologías de clonación TOPO™ y recombinación Gateway™ permiten una rápida clonación y la posterior transferencia de genes entre una amplia gama de vectores de expresión Gateway™. Opciones del kit: El kit de clonación pENTR™/SD/D-TOPO™ puede adquirirse con células competentes TOP10 para la clonación estándar o con células competentes Mach1™-T1R para un crecimiento rápido. Método de clonación: TOPO™ direccional.
Número de reacciones: 20 reacciones
Línea de productos: One Shot™
Tipo de producto: Kit de clonación TOPO
Cantidad: 20 Reacciones
Vector: pENTR
Tamaño de la unidad: cada una