Thermo Fisher, K280020, kit de clonación por PCR Zero Blunt™ TOPO™, con células de E. coli químicamente competentes One Shot™ TOP10

El kit de clonación por PCR Zero Blunt™ TOPO™ de 25 reacciones ofrece una estrategia de clonación altamente eficiente, de 5 minutos y en un solo paso ("Clonación TOPO™") para la inserción directa de productos de PCR de extremos romos, amplificados con polimerasas termoestables correctoras, en un vector plasmídico. Cada kit incluye el vector Zero Blunt™ TOPO™ (véase la figura), que contiene el gen ccdB para selección positiva, permitiendo el crecimiento de vectores plasmídicos únicamente con recombinantes. Los kits Zero Blunt™ TOPO™ están disponibles con o sin células competentes, según sus necesidades y presupuesto. Características de los kits de clonación PCR Zero™ Blunt™ TOPO™:Rápidos y fáciles: pase de PCR a clones en solo 3 pasos y en tan solo 5 minutos de tiempo práctico.Eficientes: obtenga hasta un 95 % de clones con el inserto correcto.Probados: rendimiento confiable durante más de una década con más de 4000 citas.Simples: no se requieren ligasas, procedimientos posteriores a PCR ni cebadores de PCR que contengan secuencias específicas. Kits de clonación Zero Blunt™ TOPO™: resumen. Vector: pCR™Blunt II-TOPO™: contiene el gen ccdB, lo que permite la selección directa de recombinantes. Método de clonación: Clonación TOPO™: ligadura de 5 minutos, basada en topoisomerasa I, de productos de PCR de extremos romos amplificados con polimerasas termoestables de corrección. Células competentes: diversas opciones: elija entre kits con células competentes generales, de alta eficiencia, resistentes a bacteriófagos T1 y de rápido crecimiento, o utilice sus propios kits. Vector pCR™Blunt II-TOPO™: diseñado para polimerasas de corrección. El vector pCR™Blunt II-TOPO™ está diseñado para clonar productos de PCR de extremos romos generados por polimerasas termoestables de corrección, como la Platinum™PfxDNA Polymerase. El vector pCR™Blunt II-TOPO™ contiene:
• Sitios EcoRI que flanquean el sitio de inserción del producto de PCR para una fácil escisión de los insertos
• Genes de resistencia a la kanamicina y la zeocina™ para su elección de selección en E. coli
• Sitio promotor/cebador SP6 para la transcripción y secuenciación de ARN in vitro
• Sitios de cebadores directos e inversos M13 para secuenciación o cribado por PCR. Selección de clones pCR™Blunt II-TOPO™. pCR™-Blunt II-TOPO™ permite la selección directa de recombinantes mediante la interrupción del gen letal de E. coli, ccdB. El vector contiene el gen ccdB fusionado al extremo C del fragmento LacZα. La ligadura de un producto de PCR de extremo romo interrumpe la expresión de la fusión del gen LacZα-ccdB, lo que permite el crecimiento únicamente de recombinantes positivos tras la transformación. Las células que contienen el vector no recombinante mueren al sembrarse. Por lo tanto, no se requiere cribado azul/blanco. Clonación simplificada basada en TOPO™. Con la tecnología de clonación TOPO™, no se requieren cebadores de PCR con secuencias específicas, procedimientos posteriores a la PCR, preparación del vector ni otros pasos de manipulación del ADN que requieren mucho tiempo. Simplemente añada su reacción de PCR directamente al vector con topoisomerasa, incube durante 5 minutos y transforme células competentes de E. coli. Clonación eficiente. Con hasta el 95 % de los clones con el inserto deseado, puede cribar menos clones, ahorrando tiempo y dinero. El vector pCR™Blunt II-TOPO™ utilizado en este kit incluye el gen lethalccdB para la selección eficiente de recombinantes de PCR de extremos romos generados por polimerasas de corrección termoestables. El estándar en clonación. En clonación, la tecnología de clonación TOPO™ ha sido un aliado confiable para miles de científicos durante más de diez años. Rápida, fácil de usar y eficiente, la clonación TOPO™ se ha aplicado a numerosos vectores para una amplia gama de aplicaciones. Opciones del kit Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning™ El kit Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning para la inserción directa de productos de PCR de extremos romos en un vector plasmídico se puede comprar con una variedad de células competentes que ofrecen diferentes ventajas según sus necesidades:Clonación general: células TOP10 (n.º de cat. K2800-20, K2800-40)Clonación de alta eficiencia: células TOP10 Electrocomp™ (n.º de cat. K2860-01, K2860-40)Clonación general, resistencia al bacteriófago T1: DH5α-T1R (n.º de cat. K2820-20, K2820-40)Crecimiento rápido: Mach1™-T1R Químicamente competenteE. Coli (n.° de cat.: K2830-20). Proporcione su propio kit: para mayor flexibilidad y ahorro (n.° de cat.: 450254). También ofrecemos una versión del kit que incluye el kit PureLink™ Quick Plasmid Miniprep (n.° de cat.: K2800-02) para aislar plásmidos recombinantes limpios y listos para secuenciar. Cepa bacteriana o de levadura: TOP10.
Tipo de célula: químicamente competente
Método de clonación: Blunt TOPO™
Línea de productos: One Shot™
Tipo de producto: Kit de clonación por PCR
Promotor: SP6
Cantidad: 25 Reacciones
Vector: Vectores de clonación de ADN romos
Formato: Kit
Tamaño de la unidad: cada una