Thermo Fisher, L150001, Kit GeneRacer™ con AMV RT y Kit TOPO TA Cloning™ para secuenciación

Kit GeneRacer™ con AMV RT y TOPO TA Cloning™ para secuenciación. GeneRacer™ es una técnica avanzada de RACE (amplificación rápida de extremos de ADNc) que mejora la eficiencia de la amplificación de extremos 5' y 3' de ADNc de longitud completa. Con el kit GeneRacer™ puede:
• Generar ADNc a partir de transcripciones de hasta 10 kb de longitud
• Obtener el extremo 5' completo de transcripciones raras a menos de 30 copias por célula
• Clone los extremos 5' y 3' completos para construir una secuencia completa de ADNc. El kit GeneRacer™ está disponible con la transcriptasa inversa (RT) SuperScript™ III para una mejor amplificación del extremo 5' completo de ARNm largo y complejo. La porción de ARNasa H de la RT SuperScript™ III se ha mutado para evitar la escisión del ARNm durante la síntesis de ADNc. Esto aumenta el tamaño y la producción de ADNc. La RT SuperScript™ III es más termoestable que las RT de tipo salvaje. Esto permite la transcripción inversa a temperaturas más altas, relajando la estructura secundaria de las plantillas complejas y permitiendo que la síntesis de ADNc se complete. Cómo funciona GeneRacer™: El kit GeneRacer™ garantiza que solo se amplifiquen las transcripciones que contienen extremos de ADNc completos (1,2). La Figura 1 describe cómo funciona el kit GeneRacer™. El protocolo avanzado comienza a nivel de ARN, dirigiéndose específicamente solo al ARNm con capuchón 5'. En los pasos subsiguientes, se retira la tapa y se reemplaza con el GeneRacer™ RNA Oligo. Durante la transcripción inversa, la secuencia GeneRacer™ RNA Oligo se incorpora al ADNc. Solo el ADNc que se transcribe inversamente por completo contendrá esta secuencia conocida. Luego se realiza la PCR 5' RACE utilizando el GeneRacer™ 5' Primer específico para la secuencia GeneRacer™ RNA Oligo y un cebador específico del gen. El resultado es ADN amplificado que contiene la secuencia 5' de ADNc de longitud completa. Sensibilidad y longitud Para demostrar la capacidad del GeneRacer™ Kit para capturar el extremo 5fi de ADNc de longitud completa, se amplificaron los extremos 5fi de genes con sitios de inicio de transcripción conocidos. Comenzando con el ARN total y siguiendo el protocolo GeneRacer™, se amplificaron tanto las transcripciones largas (10 kb) como los mensajes raros presentes al 0,01 %, o 30 copias por célula (Figura 2). Cepa bacteriana o de levadura: TOP10
Método de clonación: TOPO TA
Para usar con (aplicación): Transcripción inversa
Incluye: Cada kit GeneRacer contiene la caja GeneRacer, una caja RT, columnas SNAP y un kit de clonación TOPO. Tanto GeneRacer como la caja RT contienen reactivos suficientes para cinco reacciones de ADNc, una reacción de control y cebadores para 50 reacciones de PCR. La caja GeneRacer incluye las enzimas CIP, TAP, ARN ligasa T4 y sus tampones, el oligonucleótido de ARN GeneRacer (prealicuotado y liofilizado), cebadores GeneRacer y cebadores anidados, inhibidor de ribonucleasa recombinante RNaseOUT, fenol/cloroformo, glucógeno de mejillón, agua estéril y controles. Conservar a -20 °C. La caja SuperScript III RT incluye SuperScript III RT, tampón de primera cadena 5X, DTT, ARNasa H, cebadores aleatorios, el cebador dT del oligonucleótido de GeneRacer y la mezcla de dNTP. Conservar a -20 °C. La caja Cloned AMV RT incluye AMV RT clonado, tampón RT 5X, cebadores aleatorios, el cebador GeneRacer Oligo dT y una mezcla de dNTP.
Línea de productos: GeneRacer™, TA Cloning™, TOPO™
Tipo de producto: Kit de clonación
Cantidad: 1 Kit
Vector: pCR4-TOPO TA
Formato: Kit
Tamaño de la unidad: cada una