Vector de expresión de mamíferos pcDNA™4/TO de Thermo Fisher, V102020

Vector de expresión en mamíferos pcDNA™4/TO. Un sistema de expresión regulado por tetraciclina sin transactivadores virales. El sistema T-REx™ produce niveles de expresión inducida más altos que cualquier otro sistema de expresión regulado en mamíferos. Utiliza el promotor completo del CMV y añade elementos de control del operón bacteriano de resistencia a la tetraciclina para reprimir y desreprimir eficazmente la transcripción de una de las secuencias promotoras de mamíferos más potentes conocidas (1,2).
Activación específica. El sistema T-REx™ utiliza un mecanismo represor que bloquea la transcripción del potente promotor del CMV en ausencia de tetraciclina. Dado que los elementos del sistema T-REx™ no utilizan transactivadores virales, se puede lograr una expresión de alto nivel del promotor completo del CMV sin activación secundaria e inespecífica de los genes del huésped.
El mecanismo T-REx™. Los elementos de control transcripcional T-REx™ se ilustran en la Figura 1. Se insertaron dos secuencias operadoras de tetraciclina (TetO2) entre la caja TATA del promotor del CMV y el sitio de inicio de la transcripción. La secuencia TetO2 por sí sola no afecta la expresión. Cuando la proteína represora de tetraciclina (TR) está presente, se une eficazmente a los sitios TetO2 y bloquea el inicio de la transcripción. La tetraciclina añadida al medio de cultivo se une a la proteína TR y modifica su conformación. Este cambio provoca que la proteína TR libere los sitios TetO2, desreprimiendo la transcripción del promotor del CMV. El resultado es una expresión de alto nivel del gen de interés (Figura 2). Los niveles de expresión pueden modularse en función de la concentración de tetraciclina e inducirse a niveles que se alcanzan con vectores de expresión constitutivos del CMV.
T-REx™ es un potente sistema de expresión inducible en mamíferos que permite regular la expresión a partir del promotor-potenciador completo del citomegalovirus humano (CMV). Los vectores de expresión inducibles T-REx™ ofrecen las siguientes características:
• Secuencia promotora-potenciadora completa del CMV que contiene dos copias de la secuencia del operador de tetraciclina TetO2 para una expresión regulada de alto nivel
• Gen de resistencia a la zeocina™ o higromicina para la selección eficaz de líneas celulares de mamíferos estables
• Gran sitio de clonación múltiple para simplificar la clonaciónAdemás, pcDNA™4/TO/myc-His ofrece ac-mycepitope para la detección rápida de la proteína recombinante con un anticuerpo anti-myc y una secuencia de polihistidina (6xHis) para una purificación simple de la proteína recombinante con resina quelante de níquel y detección con anticuerpo anti-His (C-term).
El vector regulador, pcDNA™6/TR, se proporciona para la expresión de alto nivel de la proteína represora de tetraciclina (TR). Este vector expresa el gen de resistencia a la blasticidina para la selección rápida de líneas celulares de mamíferos que expresan de forma estable la proteína TR.
Sistema Constitutivo o Inducible: Inducible
Tipo de administración: Transfección
Para usar con (aplicación): Expresión regulada
Agente inductor: tetraciclina
Tipo de producto: Vector de expresión de mamíferos
Cantidad: 20 μg
Agente de selección (eucariota): Zeocin™
Vector: pcDNA
Método de clonación: enzima de restricción/MCS
Línea de productos: T-REx™, pcDNA™
Promotor: CMV/TO
Etiqueta de proteína: Sin etiquetar
Tamaño de la unidad: 20 µg